الغرض: يسمح لك بالتمييز بين البكتيريا من خلال الخواص البيوكيميائية لجدارها الخلوي وتحديد الخصائص المورفولوجية والصبغية.

1. تحضير مسحة ثابتة

2. ضع ورق الترشيح على اللطاخة

3. قم بإسقاط 1-2 قطرات من البنفسج الجنطياني على الورق وقم بتلوينه لمدة دقيقة واحدة

4. اغسل الطلاء مع الورق (لا داعي للشطف بالماء)

5. قم بصبغ المستحضر بمحلول لوغول على الفلتر. ورقة لمدة 1 دقيقة

6. صفي الطلاء ثم ضعيه على الفلتر. قم بإسقاط الكحول الإيثيلي على الورق لمدة 0.5 دقيقة

7. اشطفي المستحضر بالماء

8. قم بصبغ زيل فوكسين المخفف لمدة دقيقتين، على ورق الترشيح أيضًا.

9. شطف بالماء وجفف والمجهر

الجرامات "+" باللون الأزرق، والجرامات "-" باللون الوردي.

طريقة تحضير مسحة من مزرعة نمت على وسط غذائي صلب.

قم بإعداد طاولة العمل ← أشعل مصباح كحول وقم بتسخين الحلقة البكتيرية ← باستخدام حلقة، ضع قطرة ماء على شريحة زجاجية ← احرق الحلقة ← استخدم حلقة لأخذ كمية صغيرة من المادة قيد الدراسة، مع مراعاة قواعد التعقيم ← انقل المادة إلى قطرة ماء على شريحة زجاجية وافركها جيدًا لتشكيل بقعة غائمة ← احرق الحلقة مرة أخرى ← ثبت اللطاخة عن طريق تمريرها فوق اللهب 3-4 مرات ← اترك اللطاخة حتى تجف ← قم بالطلاء.

أعط خصائص البكتيريا GR(+) و GR(-).

الاختلافات بين البكتيريا GR(+) والبكتيريا GR(-).

تعد العلاقة بصبغة جرام من الخصائص المهمة للبكتيريا في التصنيف، والتي تعتمد على البنية والتركيب الكيميائي لجدار الخلية البكتيرية. هناك مجموعتان كبيرتان - البكتيريا إيجابية الجرام ("جرام+") والبكتيريا سالبة الجرام ("جرام-"). يحتفظ جدار البكتيريا إيجابية الجرام بعد صبغ الجرام بمركب اليود مع البنفسجي الجنطياني (الملون باللون الأزرق البنفسجي)، وتفقد البكتيريا سالبة الجرام هذا المركب واللون المقابل بعد المعالجة ويتم تلوينها باللون الوردي بسبب الصبغ بالفوكسين.

ملامح جدار الخلية للبكتيريا إيجابية الجرام.

جدار خلوي قوي وسميك وغير معقد، تهيمن عليه أحماض الببتيدوغليكان والتيكويك، ولا يحتوي على عديدات السكاريد الدهنية (LPS)، وغالبًا لا يحتوي على حمض ثنائي الأمينوبيميلك.

ملامح جدار الخلية للبكتيريا سالبة الجرام.

جدار الخلية أرق بكثير من جدار البكتيريا إيجابية الجرام ويحتوي على LPS والبروتينات الدهنية والدهون الفوسفاتية وحمض ثنائي الأمينوبيميلك. الهيكل أكثر تعقيدا - هناك غشاء خارجي، وبالتالي فإن جدار الخلية يتكون من ثلاث طبقات.

2. قم بالإشارة إلى إحدى ميزات التشخيص التفريقي على اللوحة المقترحة باستخدام JSA.

قم بتسمية العلامة التي تمثل التشخيص التفريقي للمكورات العنقودية.

علامة التشخيص التفريقي: مع نمو المكورات العنقوديةتشكل صبغة: أصفر ليموني ذهبي أو أبيض، وهو غير قابل للذوبان في الماء وقابل للذوبان في الأسيتون والأثير والكحول.

في MPA، تكون مستعمرات المكورات العنقودية محدبة، مستديرة، غير شفافة، لامعة، حجمها 2-4 مم مع حواف ناعمة. على أجار الدم، تتشكل منطقة انحلال الدم حول المستعمرة. يُظهر المرق تعكرًا ورواسبًا موحدة في القاع.

يكشف LSA حول المستعمرات عن إنتاج الليسيثيناز - منطقة عكرة وكورولا "قوس قزح".

3. بعد 10 سنوات من إصابته بالتيفوس، ظهرت أعراض هذا المرض على مريض دون الإصابة مرة أخرى. اسم هذه الظاهرة وطرق التشخيص المستخدمة.

الانتكاس هو تكرار المرض بعد الشفاء التام الواضح.

الطريقة الرئيسية للتشخيص المختبري للتيفوس هي التفاعلات المصلية: التراص، التثبيت التكميلي والتراص الدموي غير المباشر. يعتبر تفاعل التراص مع تشخيص محدد من ريكتسيا بروفاتشيك حساسًا للغاية ويصبح إيجابيًا في اليوم 3-5. يعتبر العيار التشخيصي للأجسام المضادة بمثابة تخفيف في المصل بنسبة 1: 100-1: 160. وتختفي الأجسام المضادة في غضون عام بعد المرض. RSC إيجابية من اليوم 7-8 من المرض؛ يصل عيار الأجسام المضادة إلى الحد الأقصى خلال الأيام 12-14، ثم يتم ملاحظة انخفاض بطيء. يمكن اكتشاف كميات صغيرة من الأجسام المضادة المثبتة للتكملة لسنوات عديدة. يصبح RNGA إيجابيًا في اليوم 7-8 من المرض. يعتبر عيار الجسم المضاد من 1: 160 - І: 200 تشخيصيًا، ويخضع لزيادته الإضافية مع تكرار RNGA.

التذكرة 5

1. قم بصبغ المستحضر باستخدام أزرق الميثيلين والمجهر واستنتج.

وصف الإجراء الخاص بإعداد اللطاخة من مزرعة تمت زراعتها على FPS.

صبغ المستحضر باستخدام أزرق الميثيلين:

1. ضع الدواء على السطح بحيث تكون المادة التي يتم اختبارها متجهة للأعلى؛

2. تنطبق على حل المخدراتصبغ لمدة 5-7 دقائق.

3. استنزاف الطلاء وشطفه بالماء.

4. جاف.

5. م/ث مع الغمر.

لتحضير اللطاخة يجب أن يكون لديك:

شريحة زجاجية نظيفة وخالية من الشحوم.

الحلقة البكتريولوجية

ثقافة نمت على وسط غذائي صلب - أجار، أو وسط سائل - مرق.

مصباح الكحول.

مجموعة الدهانات.

إذا تم تحضير اللطاخة من وسط غذائي سائل، فسيتم وضع قطرة من الثقافة في حلقة على شريحة زجاجية.

2. اختر المزارع ذات خصائص النمو للسالمونيلا على وسط يحتوي على سكرين.

قائمة وتوصيف الدراسات للتمييز بين هذا العامل الممرض.

3. تم أخذ مسحة من حلق المريض وتطعيمها على وسط غذائي. تم استخدام عاثيات المكورات العنقودية لكتابة العاثيات، ولكن لم تظهر أي منطقة تثبيط للنمو بعد 24 ساعة من الحضانة.

إعطاء استنتاج بناء على هذه البيانات.

التذكرة 6

1. الفحص المجهري للتحضير النهائي واستخلاص النتائج.

شرح الجهاز وقواعد العمل بالمجهر الضوئي.

عند العمل بالمجهر، يجب اتباع العمليات بالترتيب التالي:

1. يجب العمل بالمجهر أثناء الجلوس؛

2. افحص المجهر، امسح العدسات، العدسة، المرآة من الغبار بقطعة قماش ناعمة؛

3. ضع المجهر أمامك، إلى اليسار قليلاً، على بعد 2-3 سم من حافة الطاولة. لا تحركه أثناء التشغيل؛

4. افتح الحجاب الحاجز بالكامل، وارفع المكثف إلى أعلى موضع له؛

5. ابدأ دائمًا العمل باستخدام المجهر بتكبير منخفض؛

6. قم بخفض العدسة 8 × إلى موضع العمل، أي على مسافة 1 سم من الشريحة؛

7. النظر إلى العدسة بعين واحدة وباستخدام مرآة ذات جانب مقعر، قم بتوجيه الضوء من النافذة إلى العدسة، ثم قم بإضاءة مجال الرؤية قدر الإمكان وبشكل متساوٍ؛

8. ضع العينة المجهرية على المسرح بحيث يكون الجسم محل الدراسة تحت العدسة. بالنظر من الجانب، قم بخفض العدسة باستخدام المسمار الكبير حتى تصبح المسافة بين العدسة السفلية للعدسة والعينة الدقيقة 4-5 مم؛

9. انظر إلى العدسة بعين واحدة وقم بتدوير المسمار الخشن الموجه نحوك، وارفع العدسة بسلاسة إلى الموضع الذي يمكن من خلاله رؤية صورة الجسم بوضوح. لا يمكنك النظر إلى العدسة وخفض العدسة. قد تسحق العدسة الأمامية زجاج الغطاء وتسبب خدوشًا؛

10. تحريك العينة باليد، والعثور على الموقع المطلوب ووضعه في وسط مجال رؤية المجهر؛

11. إذا لم تظهر الصورة، فيجب عليك تكرار كافة العمليات في الخطوات 6، 7، 8، 9؛

12. لدراسة كائن متى التكبير العاليتحتاج أولاً إلى وضع المنطقة المحددة في وسط مجال رؤية المجهر بتكبير منخفض. ثم قم بتغيير العدسة إلى 40x، وقم بتدوير المسدس بحيث يأخذ موضع العمل. باستخدام المسمار ميكرومتر، الحصول على صورة جيدة للكائن. توجد علامتان على صندوق آلية الميكرومتر، وعلى برغي الميكرومتر هناك نقطة يجب أن تكون دائمًا بين العلامات. فإذا تجاوزت حدودها وجب إعادتها إلى وضعها الطبيعي. إذا لم يتم اتباع هذه القاعدة، فقد يتوقف المسمار الميكرومتر عن العمل؛

13. بعد الانتهاء من العمل بتكبير عالي، اضبط التكبير على مستوى منخفض، وارفع العدسة، وأخرج العينة من طاولة العمل، وامسح جميع أجزاء المجهر بمنديل نظيف، وقم بتغطيته بكيس بلاستيكي ووضعه في خزانة. .

2. يراعى تفاعل التثبيت المتمم (تفاعل فاسرمان). اذكر الغرض من التفاعل وأدرج المكونات المستخدمة.

رد فعل واسرمان(RW)، أو EDS (التشخيص السريع لمرض الزهري) - طريقة لتشخيص مرض الزهري

لإجراء التفاعل، المكونات التالية مطلوبة: 1) مصل الاختبار، 2) المستضدات، 3) المكمل، 4) مصل الدم الانحلالي، 5) كريات الدم الحمراء في الأغنام.

يتم أخذ جميع مكونات تفاعل واسرمان بنفس الحجم - 0.5 أو 0.25 مل.

عادة ما يتم الإشارة إلى درجة إيجابية رد فعل واسرمان من خلال عدد الصلبان + + ++ التأخير الكامل لانحلال الدم، السائل غير ملون، جميع خلايا الدم الحمراء موجودة في الرواسب؛ + + + تأخير واضح في انحلال الدم، والسائل الوردي، وخلايا الدم الحمراء في الرواسب؛ + + تأخير جزئي لانحلال الدم، يصبح السائل ملونًا بشكل مكثف، وتكون رواسب خلايا الدم الحمراء مرئية بوضوح؛ + تأخير طفيف في انحلال الدم، ويكون السائل ملونًا بشكل مكثف، وتكون الرواسب ضئيلة، وبالكاد يمكن ملاحظتها؛ - انحلال الدم الكامل، السائل ملون بشكل مكثف، لا يوجد رواسب

3. تلقى المختبر الميكروبيولوجي مادة - عينة خزعة من الغشاء المخاطي في المعدة مع تشخيص سريري: التهاب المعدة والأمعاء التقرحي. عند تلقيح مادة الاختبار، تم عزل H. PYLORI بطرق البحث الميكروبيولوجية المستخدمة لتحليل هذه العينة. طرق أخذ خزعة من الغشاء المخاطي للمعدة والاثني عشر.

عادة ما يعطي تفاعل البوليميراز المتسلسل نتيجة إيجابية (العامل الممرض موجود) أو نتيجة سلبية (العامل الممرض غير موجود). تتيح لك طريقة PCR اكتشاف حتى كمية ضئيلة من بكتيريا هيليكوباكتر بيلوري من أجل التنبؤ بالمرض، وتحديد الميل المحتمل للقرحة الهضمية أو التهاب المعدة أو سرطان المعدة.

التذكرة 7

1. المجهر ووصف الخصائص المورفولوجية للبكتيريا من المستحضرات المقترحة (رقم 1، 2). وصف المجموعات المورفولوجية المختلفة.

بواسطة مظهرتنقسم البكتيريا إلى ثلاثة أشكال: على شكل قضيب، وكروية (مكورات)، وملتفة (الضمة والحلزونية).

تختلف أشكال المكورات في شكل التقسيم والموقع في المسحات. وهي مقسمة إلى واحد أو اثنين أو ثلاثة أو أكثر من المستويات المتعامدة بشكل متبادل. عند الانقسام في مستوى واحد، يتم ترتيبها في أزواج (المكورات الثنائية) أو السلاسل (المكورات العقدية)؛ في طائرتين - أربعة (tetracocci)، في ثلاث طائرات تشكل حزم (sarcinae)؛ عند الانقسام بشكل عشوائي، يتم وضعها منفردة (المكورات الدقيقة) أو على شكل عناقيد عنب (المكورات العنقودية). الأشكال المجعدة لها مظهر حلزوني. تنقسم الكائنات الحية الدقيقة على شكل قضيب إلى بكتيريا وعصيات وكلوستريديا.

تشمل البكتيريا الكائنات الحية الدقيقة على شكل قضيب والتي لا تشكل الجراثيم (الإشريكية القولونية، السالمونيلا، مسببات الأمراض السل، وما إلى ذلك).

تشمل العصيات والمطثيات (lat. closter - spindle) الميكروبات التي تشكل جراثيم (الجمرة الخبيثة، عصيات الكزاز، العوامل المسببة للعدوى اللاهوائية).

في الشكل، تكون البكتيريا على شكل قضيب قصيرة أو طويلة أو متوسطة الحجم: ذات نهايات مدورة (معظم العصي)، ومدببة (البكتيريا المغزلية)، وقصيرة (عصية الجمرة الخبيثة) ونهايات على شكل نادي (البكتيريا الوتدية). يمكن لبعض البكتيريا أن تشكل فروعًا على شكل نتوءات جانبية (المتفطرة السلية).

بناءً على موقعها النسبي، تنقسم الأشكال القضيبية إلى ثلاث مجموعات فرعية:

يتم ترتيب diplobacillus و diplobacteria في أزواج. العقديات والعصيات العقدية - في السلاسل. البكتيريا والعصيات مرتبة بشكل عشوائي - على شكل أرقام رومانية II، V، إلخ.

أشكال ملتوية من البكتيريا. تشمل هذه المجموعة الضمات والحلزونيات واللولبيات.

Vibrios - انحناء الخلية يساوي 1/3-1/4 من حليقة اللولب، على شكل فاصلة (ضمة الكوليرا).

تحتوي Spirilla على انحناءات مع دورة واحدة أو أكثر من اللولب.

اللولبيات لها شكل يشبه المفتاح، وتختلف أحجامها بشكل كبير (العرض 0.3-1.5 ميكرومتر والطول 7-500 ميكرومتر).

يتم ترتيب البكتيريا على شكل قضيب، مثل المكورات، على طول الطول في أزواج - دبلوباكتريا أو في سلاسل - العقديات. يمكن أن تكون الأشكال على شكل قضيب مستقيمة أو منحنية، أسطوانية بشكل صارم وغير سميكة بشكل غير متساو، مع نهايات مدورة أو مدببة أو مقطعة.

في علم الأحياء الدقيقة، تلوين غرام له أهمية كبيرة. يتم استخدامه لتشخيص الأمراض المعدية وتحديد القدرة المرضية للبكتيريا. تتيح لك الطريقة التعرف على البكتيريا المشابهة في الشكل والحجم التي تنتمي إليها أنواع مختلفةوالولادة.

يعد صبغ البكتيريا بجرام طريقة معقدة يستخدم فيها نوعان من الصبغات: الأولية والثانوية. أثناء عملية المعالجة، يتم استخدام مواد التبييض، والتي تشمل الكحول والأحماض.

في علم الأحياء الدقيقة، يتم إجراء تلوين غرام باستخدام مجموعة الأصباغ ثلاثية فينيل ميثان. وتشمل هذه الجنطيانا، الميثيل الأزرق، والبنفسجي الكريستال. أنواع مختلفةتنتج البكتيريا ألوانًا مختلفة عن طريق تكوين مركبات قوية مع الأصباغ.

الألوان

في علم الأحياء الدقيقة، هناك نوعان من صبغة جرام: إيجابية الجرام وسالبة الجرام. في الحالة الأولى، تنتج الكائنات الحية الدقيقة مركبات قوية مع الأصباغ واليود. أثناء التحليل، لا يتغير لونها عند تعرضها للكحول، ولهذا السبب لا تغير لونها الأرجواني الأصلي.

تتشكل الألوان سالبة الجرام عند تعرضها لليود ويمكن تدميرها بسهولة بواسطة اليود. ونتيجة لذلك، يتغير لون الميكروبات ثم يتحول إلى اللون الأحمر.

تحضير المواد

وفقا لقواعد علم الأحياء الدقيقة، يتطلب تلطيخ الجرام إعدادا أوليا للمواد. يجب توزيعه بطبقة رقيقة على سطح الزجاج. ثم يتم تجفيف اللطاخة وتثبيتها بعد التجفيف الكامل. في هذه الحالة، يتم تثبيت اللطاخة على الزجاج، مما يمنع البكتيريا من غسلها بالأصباغ. بالإضافة إلى ذلك، فإن الكائنات الحية الدقيقة الميتة تصبغ بشكل أفضل من الكائنات الحية.

بعد تحضير المادة يتم اختيار طريقة التلوين: فيزيائية أو كيميائية. الأول ينطوي على التعرض ارتفاع درجة الحرارةلكل خلية ميكروبية. أثناء الطريقة الكيميائية، يتم استخدام مواد كيميائية مختلفة تسبب تخثر البروتينات السيتوبلازمية.

إعداد مجموعة لتلطيخ غرام والشرائح مع البكتيريا. يتم أخذها بالملاقط أو بأصابعك بعناية من الأضلاع بضربة لأعلى، ثم تمريرها عدة مرات فوق الجزء العلوي من لهب الموقد. يجب أن تستغرق العملية بضع ثوان.

تتضمن عملية التثبيت الكيميائي استخدام الأسيتون والكحول والمخاليط الخاصة وسائل كارنوي. يتم غمر الشريحة ذات اللطاخة المجففة في مثبت لمدة خمسة عشر دقيقة، ثم تجفف في الهواء.

تلوين

يتم إجراء تلطيخ المسحات بالجرام وفقًا لخوارزمية محددة.

1. أولا، يتم تطبيق الصبغة الرئيسية على اللطاخة الثابتة لبضع دقائق. لتجنب ظهور الرواسب، يتم تنفيذ الإجراء باستخدام ورق الترشيح.
2. تتم إزالة الصبغة (تصفيتها)، وإزالة الورق. يتم غمر اللطاخة في محلول لوغول لمدة دقيقتين أو في محلول يوديد جرام حتى يتحول لون المستحضر إلى اللون الأسود.
3. يتم شطف اللطاخة بمحلول كحولي أو أسيتون، ثم سكبها وتصفيتها حتى يتغير لون اللطاخة ويصبح السائل صافياً. يستغرق هذا حوالي 30 إلى 60 ثانية.
4. يتم غسل النظارات جيدًا بالماء المقطر.

لتحديد ما إذا كانت هناك بكتيريا سلبية الغرام في اللطاخة، يتم إجراء تلطيخ إضافي بالفوكسين أو السفرانين. يتم تطبيق الأدوية لمدة دقيقتين. في نهاية الإجراء، يتم غسل الزجاج وتجفيفه.

نتائج

جميع الكائنات الحية الدقيقة إيجابية الجرام مصبوغة باللون الأرجواني الداكن، والكائنات الحية الدقيقة سلبية الجرام ملطخة باللون الأحمر. الأشكال الكروية بشكل عام هي أنواع إيجابية الجرام، في حين أن الأشكال الملتوية تكون ملطخة بشكل سلبي. يمكن أن تكون البكتيريا على شكل قضيب سالبة الجرام أو موجبة الجرام.

للحصول على نتائج البحوث الأكثر موثوقية، فمن المستحسن استخدام الثقافات اليومية، فضلا عن الحلول الطازجة لتلطيخ.

تتيح لك آلية التلوين رؤية وتقييم السمات الفيزيائية والكيميائية لبنية السيتوبلازم وجدران الخلايا للبكتيريا إيجابية الجرام وسالبة الجرام. يحتوي الأول على الكثير من حمض الريبونوكليك والبروتينات في السيتوبلازم والببتيدوغليكان في جدران الخلايا. ولهذا السبب، أثناء معالجة المسحات باستخدام البنفسج الجنطياني واللوغول، يتشكل مزيج قوي من أيونات اليود والصبغة في الأنواع البكتيرية إيجابية الجرام.

عند معالجتها بالكحول، تحتفظ الكائنات الحية الدقيقة موجبة الجرام بالصبغة، في حين أن الكائنات الحية الدقيقة سالبة الجرام يتغير لونها وتتلون باللون الأحمر مع إضافة الفوكسين المخفف. بعض البكتيريا قادرة على الصبغ فقط خلال مرحلة النمو.

طلب

يستخدم تلوين الجرام لتحليل نوع الكائنات الحية الدقيقة في المسحات المهبلية واللعاب. تتيح لك هذه الطريقة تحديد نوع الكائنات الحية الدقيقة الموجودة في البراز والسائل الجنبي والبريتوني والمزيد. ويتم فحص أي سوائل قد تحتوي على بكتيريا باستخدام هذه الطريقة. بعد الصبغ، يختار الأطباء طريقة العلاج، ويصفون الأدوية التي يمكن أن تؤثر على البكتيريا إيجابية الجرام أو سلبية الجرام.

علم الأحياء الدقيقة. تلوين الجرام: الأصباغ والتنفيذ والنتائج - كل ما يتعلق بالسفر إلى الموقع

(أو طريقة جرام)- طريقة مشتقة تجريبيا لتمييز البكتيريا عن طريق صبغها بطريقة معينة إلى مجموعتين كبيرتين: إيجابية الجرام وسالبة الجرام)، تختلف في الخواص الكيميائية والفيزيائية لجدارها الخلوي.

أصل الكلمة

سميت الطريقة على اسم مخترعها العالم الدنماركي هانز كريستيان غرام (1853-1938) الذي طور الطريقة عام 1884 لتمييز البكتيريا المكورات الرئويةو الكلبسيلة الرئوية.

الاستخدام

تعتبر صبغة جرام واحدة من أكثر إجراءات الصبغ فائدة في أبحاث علم الأحياء الدقيقة المختبرية. يستخدم هذا الإجراء على نطاق واسع كأداة للتمييز بين البكتيريا سالبة الجرام وإيجابية الجرام، وعادة ما تكون الخطوة الأولى في تحديد هوية عينة بكتيرية معينة.

في الطب، يتم إجراء بقع جرام على اختبارات الدم أو الخزعات عند الاشتباه في الإصابة. هذه الطريقة أسرع بكثير من الثقافة وهي مهمة بشكل خاص عندما يكون تحديد نوع العدوى ضروريًا للتشخيص واختيار العلاج. على سبيل المثال، عند تشخيص إصابة السائل النخاعي بالتهاب السحايا وسائل المفاصل بالتهاب المفاصل الإنتاني.

عند التحليل، على سبيل المثال، تكون أشكال بكتيريا الكوكا والأبواغ، وكذلك الخميرة، إيجابية الجرام وملطخة باللون الأسود المزرق (الأزرق الداكن)، ومعظم البكتيريا الأخرى سلبية الجرام وملطخة باللون الأحمر، وهي نواة الخلايا حقيقية النواة. تصبح حمراء زاهية، والسيتوبلازم وردي اللون.

تقنية تلطيخ

تشير صبغة جرام إلى طريقة صبغ معقدة حيث تتأثر اللطاخة بصبغتين، إحداهما أولية والأخرى إضافية. بالإضافة إلى الأصباغ، في طرق الصباغة المعقدة، يتم استخدام مواد إزالة اللحاء: الكحول والأحماض وما إلى ذلك. بالنسبة لتلطيخ الجرام، غالبًا ما تستخدم أصباغ مجموعة ثلاثي فينيل ميثان: الجنطيانا أو ميثيل البنفسجي أو البنفسجي البلوري. تعطي الكائنات الحية الدقيقة موجبة الجرام (جرام (+)) ارتباطًا قويًا بالأصباغ واليود المشار إليهما. وفي الوقت نفسه، لا يتغير لونها عند تعرضها للكحول، ونتيجة لذلك، عند صبغها بجرام فوكسين (+)، لا تغير الكائنات الحية الدقيقة اللون البنفسجي الأول المرتبط.

تشكل الكائنات الحية الدقيقة سالبة الجرام (جرام (-)) مركبات تحتوي على الأصباغ الأساسية واليود ويمكن تدميرها بسهولة بواسطة الكحول. ونتيجة لذلك، يتغير لون الميكروبات ثم تتلطخ بالفوكسين، وتتحول إلى اللون الأحمر.

تحضير المواد للرسم

يتم توزيع المادة التي يتم اختبارها في طبقة رقيقة فوق سطح الزجاج المنزوع الشحوم جيدًا. يتم تجفيف اللطاخة المحضرة في الهواء وتثبيتها بعد التجفيف الكامل.

تثبيت

عند التثبيت، يتم تثبيت اللطاخة على سطح الزجاج، وبالتالي، أثناء تلطيخ المستحضر الإضافي، لا يتم غسل الخلايا. بالإضافة إلى ذلك، فإن الخلايا الميكروبية المقتولة تصبغ بشكل أفضل من الخلايا الحية. هناك طريقة فيزيائية للتثبيت، والتي تعتمد على تأثير ارتفاع درجة الحرارة على الخلية، والطرق الكيميائية، والتي تنطوي على استخدام المواد الكيميائية التي تسبب تخثر البروتينات السيتوبلازمية.

الطريقة الفيزيائية لتثبيت الزجاجخذ الدواء بالملاقط وحركه بسلاسة 2-3 مرات فوق الجزء العلوي من لهب الموقد. يجب ألا تستغرق عملية التثبيت بأكملها أكثر من ثانيتين. يتم التحقق من موثوقية التثبيت من خلال هذه الطريقة: يتم تطبيق السطح الزجاجي الخالي من اللطخات على السطح الخلفي لليد اليسرى. عندما يتم تثبيته بشكل صحيح، يجب أن يكون الزجاج ساخنًا، ولكن لا يسبب إحساسًا بالحرقان (70-80 درجة مئوية).

طريقة التثبيت الكيميائيلتثبيت المسحات، كحول الميثيل، الأسيتون، خليط نيكيفوروف (خليط من الكحول الإيثيلي 96٪ والأثير المخدر بنسبة 1: 1)، سائل كارنوي (الكحول الإيثيلي 96٪ - 60٪، الكلوروفورم 30٪، حمض الأسيتيك الجليدي). 10%) مستخدمة. يتم غمر الزجاج الذي يحتوي على اللطاخة المجففة في كوب بمادة تثبيت لمدة 10-15 دقيقة ثم تجفيفه في الهواء.

عملية الصباغة

1. يتم سكب إحدى الأصباغ الرئيسية على مسحة ثابتة لمدة 2-3 دقائق. لتجنب الرواسب، قم بالطلاء من خلال ورق الترشيح.
2. صفي الطلاء وأزيلي ورق الترشيح بعناية. تُسكب اللطاخة لمدة 1-2 دقيقة بمحلول لوغول أو محلول اليوديد حسب الجرام (محلول مائي من يوديد البوتاسيوم واليود البلوري بنسبة 2: 1) حتى يتحول لون المستحضر إلى اللون الأسود.
3. يُصفى المحلول، وتُشطف اللطاخة بالكحول الإيثيلي 96 درجة أو الأسيتون، ويُسكب ويُصفى حتى يتغير لون اللطاخة ويُصفى السائل ويصبح صافيًا (حوالي 20-40-60 ثانية).
4. اشطف الكؤوس جيدًا في الماء الجاري أو المقطر لمدة 1-2 دقيقة.
5. لتحديد البكتيريا سالبة الجرام، يتم أيضًا تلوين المستحضرات بالفوكسين أو السفرانين (2-5 دقائق).
6. يغسل بالماء الجاري ويجفف بورق الترشيح.

تنقسم جميع البكتيريا المعروفة إلى إيجابية وسلبية بناءً على قدرتها على الصبغ باستخدام طريقة جرام. يعتمد هذا التقسيم على السمات الهيكلية ولون جدار الخلية.

تتيح لك الطريقة تقسيم جميع الأنواع اعتمادًا على كثافة بنية الغلاف الخارجي لخلية الكائنات الحية الدقيقة إلى:

• أكثر مقاومة للتأثيرات البيئية وتأثير المضادات الحيوية.
• أقل استقرارا.

كان العالم الأول الذي اقترح أن بعض الأساليب المستخدمة سابقًا في علم النبات فقط يمكن استخدامها في علم الأحياء الدقيقة هو روبرت كوخ.

في عام 1884، حاول كريستيان غرام، عالم الأحياء الدنماركي المتخصص في صبغ الأنسجة، لأول مرة طريقة التمييز بين الصبغ.

جعل هذا الاكتشاف من الممكن تقسيم جميع أنواع الكائنات الحية الدقيقة الموجودة إلى إيجابية الجرام وسالبة الجرام، والتي كانت بمثابة قوة دافعة لمرحلة جديدة في تطور العلوم في مجال البحوث الميكروبيولوجية. وقد أتاح هذا أيضًا تحديد مقاومة الأنواع المسببة للأمراض للأدوية، والتنبؤ بسلوكها، والأهم من ذلك، تطوير جيل جديد من المضادات الحيوية القادرة على هزيمة المرض.

هيكل جدار الخلية

تتكون قشرة أي بكتيريا من مادة خاصة - مورين. يتكون جزيئه من سلاسل من السكريات مرتبة بالتوازي. ترتبط السكريات بدورها بسلاسل من الأحماض الأمينية مرتبة بالعرض.

يحدد هذا الاتصال قوة القشرة ومرونتها وقدرتها على الحفاظ على شكلها.نوع من الشبكات المنسوجة يحمي الطبقة الداخلية للكائنات الحية الدقيقة من عمل العوامل المدمرة ويمنع دخول الماء إلى الداخل. وفي الوقت نفسه، تسمح الفجوات بين السلاسل للخلية بامتصاص العناصر الغذائية، مثل المسام.

في الكائنات الحية الدقيقة إيجابية الجرام، تكون القشرة أكثر سمكًا وأقوى، وذلك بسبب تضمين البروتين في تركيبتها.

في الأنواع السلبية، يكون هيكل غشاء الخلية أكثر تعقيدًا، مما يسمح له بالحماية من عمل بيئات مثل اللعاب وعصير المعدة والسوائل الأخرى التي تحتوي على الليزوزيم، وهو إنزيم ذو خصائص مضادة للجراثيم. من الخارج، تكون القشرة الرقيقة محاطة بطبقة من الدهون والسكريات - وهي طبقة سطحية ناعمة.

جوهر طريقة جرام

أساس طريقة الجرام هو مبدأ تقسيم البكتيريا إلى كائنات حية دقيقة تحمل علامتي "زائد" و"سالب" حسب الجرام، وذلك بناءً على التركيب الكيميائي المختلف لجدران خلايا الكائنات الحية الدقيقة.

لتحديد البكتيريا إيجابية الجرام وسالبة الجرام، يتم تثبيت الدواء المطبق على الزجاج في طبقة رقيقة موحدة أولاً عن طريق التسخين فوق الموقد. ثم يتم صبغها بصبغة الأنيلين - ميثيل البنفسجي. وبعد ذلك يتم تثبيته باليود، ويترك حتى يجف ويغسل بالكحول.

• تكتسب الأنواع إيجابية الجرام (+Gram) لونًا أزرقًا ساطعًا.
• تصبح البكتيريا سالبة الجرام (جرام -) متغيرة اللون.

الخطوة الأخيرة هي تلطيخ المستحضر بصبغة تباين حمراء، مما يسمح لك بالحصول على الكائنات الحية الدقيقة سالبة الجرام ذات اللون الأحمر أو الوردي. ويرجع ذلك إلى حقيقة أن الصبغة لا يمكنها اختراق الخلية بسبب طبقتها الخارجية السميكة، مما يؤدي إلى تلطيخ السطح فقط.

تكتسب الميكروبات الميتة لونًا أكثر إشراقًا مقارنة بالميكروبات الحية.

خصائص البكتيريا إيجابية الجرام

معظم البكتيريا إيجابية الجرام مسببة للأمراض للإنسان. هذه هي مسببات الأمراض الخطيرة:

1. العقدية (Streptococcus) التي تسبب التهاب اللوزتين، والتهاب البلعوم، والروماتيزم.
2. المكورات العنقودية (المكورات العنقودية) هي العامل المسبب لتسمم الدم والأمراض الجلدية القيحية.
3. الليستيريا، والتي تسبب داء الليستريات، وهو التهاب في الدماغ.
4. العصيات (Bacillus) هي العوامل المسببة للعدوى السامة والجمرة الخبيثة.
5. كلوستريديا (كلوستريديوم)، تسبب التسمم الغذائي، والكزاز، والغرغرينا الغازية.

النوعان الأخيران عبارة عن كائنات لاهوائية مكونة للأبواغ، أما الباقي فلا يمكن أن يشكل بوغًا. بعضها قادر على الصبغ فقط في مرحلة النمو النشط.

البكتيريا سالبة الجرام

هذه هي البكتيريا التي يتغير لونها تمامًا بعد الغسيل بالكحول. ونتيجة لتكرار صبغها بالسافرانين فإنها تكتسب لوناً وردياً أو أحمراً ساطعاً. وهي أكثر مقاومة للأجسام المضادة من الأنواع Gram+.

تشمل البكتيريا سالبة الجرام بشكل رئيسي البكتيريا الانتهازية التي يمكن أن تسبب عمليات التهابية واستجابة مناعية في جسم الإنسان في ظل ظروف معينة. يؤدي غشاء الخلية، الذي يتكون من طبقة عديد السكاريد الدهني، إلى تخليق السيتوكينات، مما يساهم في زيادة السموم في موقع الالتهاب. وفي وقت لاحق، تسبب السموم المنقولة عبر مجرى الدم ذات التأثير السام أعراض التسمم الشديدة.

الدور المهم لطريقة الجرام في تشخيص الأمراض

لا غنى عن الطريقة التي تسمح للمرء بالتمييز بين البكتيريا إيجابية الجرام والسالبة عند دراسة المواد البيولوجية البشرية للكشف عن العدوى البكتيرية.

المواد المستخدمة في التشخيص:

• البلغم يسمح لك بتصنيف تكوين البكتيريا في البلعوم الأنفي، والكشف عن مسببات الأمراض.
• تكشف اختبارات البراز عن السموم التي تنتجها الأنواع إيجابية الجرام؛
• المسحة المهبلية تجعل من الممكن حساب النسبة المئوية للميكروبات سالبة الجرام والإيجابية لتشخيص التهاب المهبل الجرثومي.
• تعتبر السوائل الجنبية والزليلية والفترة المحيطة بالولادة مفيدة أيضًا.

سمحت الطريقة التي قدمها كريستيان جرام للعلم بإحراز تقدم كبير في المعرفة حول بنية الميكروبات وآليات الحماية الخاصة بها. لقد جعل من الممكن إدخال النظام الأكثر دقة لتقسيم البكتيريا إلى إيجابية وسلبية، والذي لا يزال يستخدم لتشخيص الأمراض المعدية.

من السهل إرسال عملك الجيد إلى قاعدة المعرفة. استخدم النموذج أدناه

سيكون الطلاب وطلاب الدراسات العليا والعلماء الشباب الذين يستخدمون قاعدة المعرفة في دراساتهم وعملهم ممتنين جدًا لك.

تم النشر على http://allbest.ru

وزارة التعليم في جمهورية بيلاروسيا

جامعة ولاية بيلاروسيا

كلية الأحياء

وصمة عار غرام

أوفشاروفا آنا إيجوريفنا

طلاب السنة الثالثة,

تخصص "علم الأحياء"

مينسك، 2016

مقدمة

1. تقنية الرسم

1.1 تحضير المواد للرسم

1.2 التثبيت

1.2.1 الطريقة الفيزيائية للتثبيت

1.2.2 طريقة التثبيت الكيميائي

1.3 عملية تلطيخ المسحات

2. تقنية جرام ويجرت لتلوين البكتيريا في المقاطع النسيجية

2.1 تعديل هوكر

2.2 تعديل بورك

2.3 تعديل كوبيلوف بيرمان

2.4 تعديل بريستون موريل

3. الأخطاء

3.1 تتحول البكتيريا إيجابية الجرام إلى اللون الأحمر

3.2 تتحول البكتيريا سالبة الجرام إلى اللون الأزرق

مقدمة

اعتمادا على بنية جدار الخلية، تنقسم بدائيات النوى التي تنتمي إلى eubacteria إلى مجموعتين كبيرتين. تم اكتشاف أنه إذا تمت معالجة الخلايا الحقيقية البكتيرية أولاً باستخدام اللون البنفسجي البلوري ثم باستخدام اليود، فسيتم تشكيل مركب ملون.

أثناء العلاج اللاحق بالكحول، اعتمادًا على بنية جدار الخلية، يختلف مصير المركب: في ما يسمى بالأنواع إيجابية الجرام، تحتفظ الخلية بهذا المركب، ويظل الأخير ملونًا بسلبية الجرام على العكس من ذلك، يتم غسل المجمع الملون من الخلايا، ويتغير لونها. (تم اقتراح هذه الطريقة لأول مرة في عام 1884 من قبل العالم الدنماركي تش. غرام، الذي كان يعمل في صباغة الأقمشة. وقد تم استخدامها لاحقًا للبكتيريا).

في بعض أنواع البكتيريا الحقيقية، يكون التفاعل الإيجابي عند صبغها بالطريقة الموضحة أعلاه مميزًا فقط للخلايا التي تكون في مرحلة النمو النشط. لقد وجد أن المركب الملون يتشكل على البروتوبلاست، ولكن احتباسه بواسطة الخلية أو ترشيحه منه أثناء العلاج اللاحق بالكحول يتم تحديده من خلال السمات الهيكلية لجدار الخلية. تزيد مستحضرات الصبغ من حساسية الفحص المجهري، حيث أن البكتيريا غير الملوثة لا يمكن تمييزها بشكل جيد حتى عند التكبير 400-1000.

يتم استخدام صبغة جرام التفاضلية الأكثر شيوعًا، على الرغم من استخدام الصبغات أحادية اللون أيضًا. يسمح تلوين غرام للمرء بالتمييز بين البكتيريا التي يتكون جدارها الخلوي السميك بالكامل تقريبًا من الببتيدوغليكان (إيجابية الجرام) والبكتيريا التي يحتوي جدارها الخلوي، بالإضافة إلى طبقة رقيقة من الببتيدوغليكان، على غشاء خارجي يتكون من البروتينات الدهنية والسكريات الدهنية (سلبية الجرام). . يتم تثبيت الصبغة الأساسية (مثل البنفسج البلوري) بقوة في جدار البكتيريا إيجابية الجرام، مما يمنحها اللون الأزرق والأسود، ويتم غسلها بسهولة بالكحول (أو الأسيتون) من جدار البكتيريا سالبة الجرام، وبعد ذلك يتم تلطيخها باللون الأحمر بصبغة متباينة (على سبيل المثال، السفرانين).

لا غنى عن تلطيخ غرام عند فحص مسحات البلغم. إذا تم الحصول على البلغم بشكل صحيح، فسوف يحتوي على 25 عدلة على الأقل وأقل من 10 خلايا ظهارية لكل مجال رؤية منخفض الطاقة. يشير العدد الأكبر من الخلايا الظهارية ومجموعة متنوعة من الأنواع البكتيرية إلى أن البلغم ملوث بمحتويات البلعوم. على الرغم من أنه من الصعب في كثير من الأحيان التمييز بين البكتيريا المسببة للأمراض والبكتيريا المسببة للأمراض، فإن تلوين جرام للطاخة يوفر معلومات قيمة إذا كانت البكتيريا المسببة للأمراض لديها أي علامة يمكن اكتشافها (إشارة بيولوجية). على سبيل المثال، متى التهاب المهبل البكتيريتظهر اللطاخة المهبلية الخلايا الظهارية المنقطة بالبكتيريا إيجابية الجرام.

يتم استخدام الفحص المجهري لمسحات البراز الملطخة بصبغة جرام كاختبار فحص. عندما يتم الكشف عن العدلات، فإنها تبدأ الفحص البكتريولوجي وتحديد السموم المنتجة المطثية العسيرة .

تُستخدم صبغة جرام أيضًا لتحديد البكتيريا وخلايا الدم البيضاء في السائل الدماغي الشوكي والسائل الزليلي والجنبي والصفاقي. الحد الأدنى للحساسية لهذه الطريقة هو 10000 بكتيريا لكل 1 مل.

لزيادة الحساسية، يتم طرد سائل الاختبار ويتم تحضير مسحة ملطخة من الرواسب. ويسمى هذا الإجراء الإثراء المادي. إنه بسيط ومفيد بشكل خاص لتحديد البكتيريا وخلايا الدم البيضاء في السائل الدماغي الشوكي والبكتيريا المقاومة للأحماض في البلغم.

1. تقنية الرسم

يشير صبغ جرام إلى طريقة صبغ معقدة يتم فيها تعريض اللطاخة لصبغتين، إحداهما أولية والأخرى إضافية. بالإضافة إلى الأصباغ، تستخدم طرق الطلاء المعقدة عوامل التبييض: الكحول والأحماض وما إلى ذلك.

بالنسبة لتلطيخ جرام، غالبًا ما تستخدم أصباغ مجموعة ثلاثي فينيل الميثان: الجنطيانا أو البنفسج الميثيل أو البنفسجي البلوري. تعطي الكائنات الحية الدقيقة موجبة الجرام (+) علاقة قوية مع الأصباغ واليود المشار إليها. في الوقت نفسه، لا يتغير لونها عند تعرضها للكحول، ونتيجة لذلك، مع تلطيخ إضافي باستخدام جرام فوكسين (+)، لا تغير الكائنات الحية الدقيقة اللون البنفسجي المعتمد في البداية.

تشكل الكائنات الحية الدقيقة سالبة الجرام (؟) مركبًا يحتوي على الأصباغ الأساسية واليود الذي يمكن تدميره بسهولة بواسطة الكحول. ونتيجة لذلك، يتغير لون الميكروبات ثم تتلطخ بالفوكسين، وتكتسب لونًا أحمر.

1.1 تحضير المواد للرسم

يتم توزيع مادة الاختبار في طبقة رقيقة فوق سطح شريحة زجاجية منزوعة الشحوم جيدًا.

يتم تجفيف اللطاخة المحضرة في الهواء وتثبيتها بعد التجفيف الكامل. يتم تحضير المقاطع النسيجية وفقًا للتقنيات الروتينية، حيث يتم تثبيت قطع الأنسجة في الفورمالديهايد ودمجها في البارافين.

1.2 التثبيت

عند التثبيت، يتم تثبيت اللطاخة على سطح الشريحة الزجاجية، وبالتالي، أثناء تلطيخ المستحضر لاحقًا، لا يتم غسل الخلايا الميكروبية. بالإضافة إلى ذلك، فإن الخلايا الميكروبية المقتولة تصبغ بشكل أفضل من الخلايا الحية.

هناك طريقة فيزيائية للتثبيت، والتي تعتمد على تأثير ارتفاع درجة الحرارة على الخلية الميكروبية، والطرق الكيميائية، والتي تنطوي على استخدام المواد الكيميائية التي تسبب تخثر البروتينات السيتوبلازمية.

1.2.1 بدنيطريقتثبيت

يتم أخذ شريحة التحضير باستخدام ملاقط أو أصابع I و II من اليد اليمنى بواسطة الأضلاع بضربة لأعلى وتحريكها بسلاسة 2-3 مرات فوق الجزء العلوي من لهب الموقد. يجب ألا تستغرق عملية التثبيت بأكملها أكثر من ثانيتين.

يتم التحقق من موثوقية التثبيت بالطريقة التالية: يتم تطبيق السطح الخالي من اللطاخة لشريحة زجاجية على السطح الخلفي لليد اليسرى. عند تثبيت اللطاخة بشكل صحيح، يجب أن يكون الزجاج ساخنًا، ولكن لا يسبب إحساسًا بالحرقان (70-80 درجة مئوية).

1.2.2 كيميائيطريقتثبيت

لإصلاح المسحات، استخدم كحول الميثيل، والأسيتون، وخليط نيكيفوروف (خليط من الكحول الإيثيلي 96% والأثير المخدر بنسبة 1:1)، وسائل كارنوي (الكحول الإيثيلي 96% - 60%، والكلوروفورم 30%، وحمض الأسيتيك الجليدي 10). %). يتم غمر الشريحة ذات اللطاخة المجففة في زجاجة مع عامل تثبيت لمدة 10-15 دقيقة ثم تجفيفها في الهواء.

1.3 عملية تلطيخ المسحات

1 يتم سكب أحد الأصباغ الأساسية على مسحة ثابتة لمدة 2 أو 3 دقائق. لتجنب هطول الأمطار، وصمة عار من خلال ورق الترشيح.

1. صفي الطلاء وأزيلي ورق الترشيح بعناية. يتم ملء اللطاخة بمحلول لوغول أو محلول يوديد غرام (محلول مائي من يوديد البوتاسيوم واليود البلوري بنسبة 2:1) لمدة 1-2 دقيقة حتى يتحول لون المستحضر إلى اللون الأسود.

2. يتم تصريف المحلول، ويتم شطف اللطاخة بالكحول الإيثيلي 96 درجة أو الأسيتون، ثم يتم سكبها وتصفيتها حتى يتغير لون اللطاخة ويصبح السائل المتدفق واضحًا (حوالي 20-40-60 ثانية).

3. اشطف الزجاج جيدًا بالماء الجاري أو المقطر لمدة 1-2 دقيقة.

4. لتحديد مجموعة البكتيريا سالبة الجرام، يتم أيضًا صبغ المستحضرات بالفوكسين أو السفرانين (2-5 دقائق).

5. يغسل بالماء الجاري ويجفف بورق الترشيح.

2. تقنية جرام ويجرت لتلوين البكتيريا في المقاطع النسيجية

1. يتم إحضار الأجزاء التي تمت إزالة الشمع منها إلى الماء.

2. صبغ لمدة 20 دقيقة في محلول 1٪ من باراروزانيلين أو الفوكسين الأساسي في 1٪ من حمض الأسيتيك (يتم تسخين محلول الصبغة حتى الغليان وتبريده وتصفيته).

3. يغسل في 3 مرات من الماء المقطر.

4. قم بصبغه لمدة 5 دقائق في 1% من اللون البنفسجي البلوري في الماء المقطر.

5. اشطفه بسرعة بمحلول كلوريد الصوديوم 1%.

6. عالج لمدة 30 ثانية في خليط من: 1 جزء من اليود + 2 جزء من يوديد البوتاسيوم + 100 جزء من الماء المقطر.

7. امسح بورق الترشيح.

8. التفريق عن طريق تطبيق خليط من كميات متساوية من الأنيلين والزيلين (1 - 2 مل) على القطع؛ يتم تصريف المحاليل حتى تتوقف سحب الصبغة عن التحرك بعيدًا عن القطع.

9. قم بإجراء 3 تغييرات على الزيلين

10. يغلف بالبلسم أو أي راتينج مذاب في الزيلين.

النتيجة: البكتيريا إيجابية الجرام لونها أزرق مائل إلى الأسود، والفبرين أرجواني، والنواة حمراء.

2.1 تعديل هوكر

بكتيريا تلطيخ النسيجية

2.2 تعديل بورك

2. التلوين بالصبغة الأساسية. يُسكب المحلول أ على اللطاخة ويُضاف 2-3 قطرات من المحلول ب (2-3 دقائق).

4. اشطفيه بماء الصنبور وأزيلي الماء الزائد بعناية باستخدام ورق الترشيح (لا تجففيه).

7. قم بالطلاء بصبغة إضافية. (5-10 ثواني).

2.3 تعديل كوبيلوف بيرمان

1. يتم تجفيف اللطاخة في الهواء دون تسخين. لا يسجلون.

2. التلوين بالصبغة الأساسية. يتم خلط المحاليل a و b بنسبة 15:4. تنطبق على مسحة (5 دقائق أو أكثر).

3. اغسله بمحلول لوغول. صب محلول لوغول على اللطاخة (دقيقتان أو أكثر).

4. تخلص من محلول لوغول الزائد. لا تشطف.

5. قم بإزالة اللون عن طريق إضافة خليط من الأسيتون والإيثر قطرة قطرة حتى تتوقف الصبغة عن الخروج (عادة حوالي 10 ثوانٍ).

6. جفف الدواء في الهواء.

7. قم بالطلاء بصبغة إضافية. (1-2 دقيقة).

8. اشطف المستحضر وجففه.

2.4 تعديل بريستون موريل

1. ضعي الصبغة الرئيسية على اللطاخة الثابتة (دقيقة واحدة).

2. قم بتصفية الصبغة، ثم اشطف المستحضر بماء الصنبور (لا يزيد عن ثانيتين).

3. ضع الدواء في محلول لوغول (دقيقة واحدة).

4. اشطفيه بماء الصنبور وجففيه جيدًا.

5. ضع المستحضر في الكحول وقم بإزالة لونه عن طريق رجه قليلاً. تجف جيدا.

6. قم بإنهاء أحد الأصباغ الإضافية (10 ثوانٍ).

7. اشطف المستحضر وجففه.

3. الأخطاء

3.1 تتحول البكتيريا إيجابية الجرام إلى اللون الأحمر

تغير لون اللطاخة بشكل مفرط (الخطأ الأكثر شيوعًا)	· قم بإعداد مسحة جديدة وكرر عملية الصبغ، مما يقلل من وقت المعالجة بمحلول التبييض · عرض العديد من مجالات الرؤية في مسحة مدللة. في بعض الأحيان يمكنك العثور على تلك المناسبة · إذا لم يكن من الممكن تحضير مسحة جديدة، قم بتبييض القطعة الموجودة بالكامل، ثم اشطفها جيدًا بالماء، ثم جففها ثم كرر عملية التلوين
الثقافة القديمة	· يؤخذ في الاعتبار صبغة جرام للمزارع اليومية (للبكتيريا التي تنمو ببطء - بعد يومين إلى ثلاثة أيام). أثناء التخزين على المدى الطويل على وسيلة المغذيات، لوحظ انحطاط طبقة مورين. استخدم الثقافة المناسبة للعمر
تمت زراعة المحصول في ظروف غير مواتية	· عند نموها على أوساط انتقائية، قد تتشكل طبقة مورين رقيقة جداً زراعة الكائنات الحية الدقيقة على وسيلة كاملة

3.2 تتحول البكتيريا سالبة الجرام إلى اللون الأزرق

اللطاخة سميكة جدًا أو تحتوي على تكتلات (على سبيل المثال، ذات تراص ذاتي)	· لا يتم الاحتفاظ بالصبغة عن طريق جدار الخلية، ولكن بسبب الشعيرية الموجودة في الفراغات بين الخلايا في الكتلة · رؤية مجالات رؤية متعددة، ربما يحتوي المستحضر على مجالات رؤية ذات "سمك" عادي للمسحة كرر تحضير الدواء، مع أخذ ثقافة أقل وإعداد اللطاخة على مساحة أكبر · إذا كانت المزرعة ملتصقة ذاتياً، خذ الماء المقطر لتحضير اللطاخة
اللطاخة مبيضة بشكل سيء	· عرض العديد من المجالات البصرية، من الممكن أن تحتوي العينة على مجالات بصرية ذات تغير لوني طبيعي كرري تحضير المستحضر وتلوينه · إعادة تبييض المسحة الموجودة · التأكد من تحضير محلول التبييض بشكل صحيح. إذا تكرر الخطأ، استبدل الحل.
ملامح بنية جدار الخلية (البكتيريا المتغيرة الجرام)

تم النشر على موقع Allbest.ru

...

وثائق مماثلة

ملامح بنية الخلايا البكتيرية والمكونات الدائمة وغير الدائمة للخلية البكتيرية وأساسيات تلوينها بالجرام. تخمير حمض البروبيونيك وطرق تغذية الكائنات الحية الدقيقة. التقييم الصحي للنفط على أساس المؤشرات الميكروبيولوجية.

تمت إضافة الاختبار في 21/10/2010


تعريف الغرض ووصف آلية طرق تحديد الكيمياء النسيجية المواد الكيميائيةفي المقاطع النسيجية. وصف المجهر الإلكتروني والفلورسنت والأشعة فوق البنفسجية. التصوير الشعاعي الذاتي وثقافة الخلايا والأنسجة خارج الجسم.

الملخص، تمت إضافته في 09/09/2014


تقنية تحضير الاستعدادات النسيجية للفحص المجهري الضوئي والمراحل الرئيسية لهذه العملية ومتطلبات شروط تنفيذها. طرق البحث في علم الأنسجة وعلم الخلايا. مخطط تقريبي لتلطيخ مستحضرات الهيماتوكسيلين - الأيوزين.

تمت إضافة الاختبار في 10/08/2013


تاريخ الدراسة المنهجية لأنماط تطور الأنسجة. نظرية التوازي في الهياكل النسيجية. نظرية التطور المتباين للأنسجة. نظرية نشوئها في الأنسجة. مشتقات الظهارية واللحمة المتوسطة والأنسجة العضلية والعصبية.

تمت إضافة العرض في 11/12/2015


الهياكل الحجرية ذات الطبقات (الستروماتوليت) هي نتيجة لنشاط البكتيريا باعتبارها أقدم مجموعة من الكائنات الحية. دراسة البكتيريا وشكلها وبنيتها وحجمها وتوزيعها. تصنيف البكتيريا حسب طريقة التغذية والتكاثر.

تمت إضافة العرض في 14/10/2011


طرق دراسة مورفولوجية الكائنات الحية الدقيقة عن طريق الفحص المجهري للمستحضرات المحضرة من المزارع النقية عن طريق الصبغ. طرق الصبغة الحيوية للكائنات الحية الدقيقة لتجنب التشوهات الناتجة عن التأثير السام للصبغة.

تمت إضافة العرض بتاريخ 23/02/2016


تقسيم الطحالب إلى مجموعات نظامية ذات رتبة أعلى، ومطابقته لطبيعة اللون والخصائص الهيكلية. أغشية الخلايا من الطحالب. التكاثر اللاجنسي والجنسي للطحالب. أوجه التشابه والاختلاف بين الطحالب الصفراء والخضراء والطحالب الخضراء.

الملخص، تمت إضافته في 06/09/2011


تغذية البكتيريا. طرق دخول العناصر الغذائية إلى الخلية. تصنيف البكتيريا حسب أنواع الغذاء ومصادر الطاقة والإلكترونات. تخمير حمض البروبيونيك، المشاركون الرئيسيون، خصائصهم، استخدامها في الاقتصاد الوطني.

تمت إضافة الاختبار في 29/11/2010


التاريخ و الخصائص العامةالمجموعة ووصف سلالاتها ، ميزات مميزةوالخصائص. تلوين الكلاب ومبادئ وراثتها. ملامح وراثة الألوان وغيرها من السمات المهمة في اختيار كلاب مجموعة "الثور" والخصائص العقلية.

أطروحة، أضيفت في 20/04/2012


مفهوم وآلية عمل الجهاز الحسي الذوقي (محلل التذوق، عضو التذوق). نقل إشارة الذوق والاضطرابات الأساسية. تعميم العوامل الضارة. تحسين طريقة تلوين خلايا التذوق بأزرق الميثيلين.